TurboTEV蛋白酶是一种增强型半胱氨酸蛋白酶，源自烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白的催化片段。它具有高特异性，可识别和切割位于Gln和Gly之间的Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly切割位点。此蛋白酶在4°C下具备强大的活性，展现出卓越的稳定性和高特异性，且不需要特殊缓冲液，能够在适合目标蛋白的缓冲液中顺利发挥作用。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，带有GST和His标签，因此能够通过Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂轻松去除剪切标签。其活性统一标准为大肠杆菌来源，活性超过10单位/µg，其中1单位TurboTEV蛋白酶在30℃下能在1小时内有效裂解3µg对照底物的85%。

### 操作步骤

1. **溶液裂解**

A. 配制新鲜的冰冷透析缓冲液，示例成分为25mM Tris-HCl (pH 8.0)、150-500mM NaCl和14mM β-巯基乙醇。
B. 使用透析缓冲液将目标蛋白样品稀释至1-2 mg/mL。如目标蛋白在透析缓冲液中聚集，可以选择省略此步骤。留取一小份未切割的样品用于后续分析。如样品源自镍柱洗脱且EDTA兼容，可以加入EDTA至最终浓度0.5mM。
C. 按照1:100的比例加入TurboTEV蛋白酶，例如100mg目标蛋白对应1mg（10000单位）的TurboTEV蛋白酶。
D. 在4°C下用透析缓冲液透析过夜（约16小时）。

2. **去除TurboTEV蛋白酶**

3. **SDS-PAGE分析（可选）**

### 产品应用

TurboTEV蛋白酶广泛应用于以下领域：
- 蛋白质裂解功能
- 从重组蛋白中去除融合标签
- 蛋白质和肽的纯化

### 常见问题解答

1. **问：TEV消化反应时缓冲液条件的重要性**

答：各缓冲液条件对TurboTEV剪切效率有一定影响。具体数据如下：
(a) 1mM DTT可以使用；
(b) 不推荐使用10%甘油；
(c) 不推荐使用20mM组氨酸；
(d) 不建议使用500mM NaCl；
(e) 不建议使用100mM Tris；
(f) β-巯基乙醇可与DTT类似使用。

2. **问：需不需要在剪切前缓冲液交换？**

答：这视具体情况而定，可能是必要的。

### 产品引用文献

相关科研论文和研究提供了TurboTEV蛋白酶在各领域的广泛应用，详细资料可参考相关期刊。

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