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实验揭秘:尊龙凯时-人生就是博如何用DpnI内切酶解决环形载体残留问题

发布时间:2025-01-30   信息来源:尊龙凯时官方编辑

尊龙凯时-人生就是博推出的DpnI是一种限制性内切酶,专门用于切割甲基化DNA位点。DpnI具备高度的特异性,能识别GA/TC序列,并仅在识别位点的A碱基被甲基化时才会发生切割,未被甲基化的位点则不会被影响。

实验揭秘:尊龙凯时-人生就是博如何用DpnI内切酶解决环形载体残留问题

DpnI的应用范围

DpnI在分子克隆与定点突变实验中得到了广泛应用。参与实验的模板质粒通常是从细菌(如大肠杆菌)中提取,这些质粒往往是甲基化的,而PCR扩增生成的新DNA是非甲基化的。DpnI的特性使其能够选择性降解含有甲基化序列的模板DNA,同时保留未甲基化或半甲基化的扩增产物。这一特性可用于去除点突变实验中的未突变模板,或者在构建线性载体时消除环形质粒模板,确保模板的单一性。

产品简介

DpnI来源于携带DpnIR基因的肺炎双球菌G41,经过克隆至大肠杆菌中表达。该限制性内切酶能够有效识别并切断腺嘌呤甲基化的序列GmATC,而不影响非甲基化的GATC序列。同时,它能有效切割来源于常用大肠杆菌(dam+)的DNA,但不会切割PCR产物,且不受dam甲基化酶的影响。DpnI可广泛应用于分子克隆、基因分型、DNA印迹、限制性片段长度多态性(RFLP)技术、单核苷酸多态性(SNP)等多个生物医学领域。

产品特点

  • 特异性:能够专一性识别并切割甲基化的GA/TC序列。
  • 高效性:1U的DpnI在37℃下反应1小时可消化1μg甲基化DNA。

实验案例

在一项实验中,从JM110菌株(dam-)和DH5α菌株(dam+)中提取500ng质粒,在20μl的酶切体系中加入10U的DpnI,37℃下反应1小时。凝胶电泳分析显示,DH5α中提取得到的甲基化质粒被DpnI完全消化,而从JM110中提取得到的非甲基化质粒未出现任何非特异性的酶切效果。进一步实验发现,从DH5α中提取得到的甲基化质粒在DpnI消化1小时后,没有产生任何克隆,这进一步验证了DpnI在1小时内能够完全消化甲基化质粒DNA,体现出其在克隆转化实验中的优越特性。

通过尊龙凯时-人生就是博提供的DpnI,研究人员能够显著提高分子克隆和基因突变实验的效率与特异性,为生物医学研究及应用带来更多的便利。